成为皇后之后，吴氏迅速进入角色。她严格按照《女诫》《内训》的要求约束自己，每日清晨都亲自到太后宫中请安，处理后宫事务时更是公正严明。对于宫中的宫女太监，她宽厚仁慈，从不随意苛责；对于其他妃嫔，她也以礼相待，从不恃宠而骄。在她的治理下，后宫秩序井然，大臣们对此纷纷称赞，认为吴氏是一位合格的皇后。
可朱见深对吴氏的态度却始终冷淡。他很少去中宫留宿，大部分时间都与万贞儿待在一起。万贞儿仗着皇帝的宠爱，在宫中越发骄横，不仅不把吴氏放在眼里，甚至还时常故意刁难。有一次，吴氏按照惯例召集后宫妃嫔议事，万贞儿却迟迟不到，直到议事结束才慢悠悠地赶来，面对吴氏的询问，她只轻描淡写地说：“陛下留臣妾说话，故而来迟，还请皇后娘娘恕罪。”其傲慢之态，溢于言表。
吴氏身边的宫女都为她抱不平，劝她拿出皇后的威严惩治万贞儿。可吴氏却摇了摇头，她知道，万贞儿有皇帝撑腰，此刻惩治她，只会让皇帝更加反感自己。她选择了隐忍，希望用自己的宽容和大度，让万贞儿有所收敛，也让朱见深看到自己的良苦用心。然而，吴氏的隐忍不仅没有换来万贞儿的安分，反而让她更加得寸进尺。
不久之后，万贞儿在宫中私自使用皇后级别的仪仗，还纵容自己的宫女抢夺其他妃嫔的物品。事情传到吴氏耳中后，她再也无法容忍。按照宫中规矩，她传召万贞儿到中宫问话。面对吴氏的质问，万贞儿不仅拒不认错，反而出言不逊：“陛下宠爱臣妾，臣妾用些仪仗又何妨？皇后娘娘如此斤斤计较，莫不是嫉妒陛下对臣妾的恩宠？”
这句话彻底激怒了吴氏。她身为皇后，执掌后宫礼仪，万贞儿的所作所为不仅是对她个人的羞辱，更是对后宫秩序的破坏。盛怒之下，吴氏下令将万贞儿杖责二十。这二十杖，打得万贞儿皮开肉绽，也彻底点燃了她与朱见深之间的矛盾。
被杖责后的万贞儿，哭哭啼啼地跑到朱见深面前告状。她褪去衣衫，露出满是伤痕的脊背，声泪俱下地说：“陛下，皇后娘娘她嫉妒臣妾得宠，故意找借口责罚臣妾，臣妾险些就见不到陛下了！”朱见深看着万贞儿身上的伤痕，心疼得无以复加。在他心中，万贞儿是他生命中最重要的人，任何人都不能伤害她，即便是皇后也不行。
怒火中烧的朱见深立刻赶往中宫，不分青红皂白地斥责吴氏：“皇后善妒，竟敢私自责罚贵妃，你眼中还有朕吗？”吴氏没想到朱见深会如此不分是非，她急忙解释：“陛下，万贵妃私自使用皇后仪仗，违反宫规，臣妾只是按规矩惩治，并非善妒。”可此时的朱见深根本听不进任何解释，他指着吴氏的鼻子怒吼：“朕看你就是容不下贞儿！你这个皇后，不配母仪天下！”
朱见深的话，如同一把尖刀，刺穿了吴氏的心脏。她看着眼前这个自己名义上的丈夫，第一次感到了绝望。她知道，朱见深是铁了心要为万贞儿出头，自己的解释在他眼中不过是狡辩。果然，朱见深当天就召集内阁大臣，提出要废黜吴氏的皇后之位。
这个提议立刻遭到了大臣们的强烈反对。李贤等先帝旧臣直言不讳地说：“皇后是先帝钦定，登基不久便废后，于礼不合，也会引起朝野震动。万贵妃虽受宠，但违反宫规在先，皇后责罚并无不妥，还请陛下收回成命。”大臣们的反对，让朱见深陷入了两难境地。他知道，没有大臣们的支持，废后之事很难成行。就在这时，万贞儿身边的太监牛玉，向他献上了一条“妙计”。
牛玉曾是朱祁镇身边的太监，在太子选妃时负责相关事务。他告诉朱见深，当年选妃时，他曾受吴氏家人的贿赂，故意将吴氏排在第一位，先帝之所以选定吴氏，都是他从中作梗。这个说法，无疑给了朱见深废后的绝佳理由——吴氏的皇后之位，本就是通过不正当手段得来的，废黜她理所当然。
朱见深如获至宝，立刻下令将牛玉逮捕入狱，严刑拷打。在酷刑之下，牛玉“招认”了自己收受贿赂、操纵选妃的“罪行”。朱见深随即召集大臣，拿出牛玉的“供词”，说：“吴氏德行有亏，其皇后之位乃是通过贿赂得来，朕岂能容这样的人母仪天下？今日必废之！”
大臣们看着“铁证如山”的供词，虽仍有疑虑，但也不敢再公然反对。毕竟，牛玉是先帝身边的太监，他的“招认”让吴氏的身份变得名不正言不顺。李贤等人思虑再三，最终还是选择了妥协。成化元年八月二十二日，距离吴氏被册封为皇后仅仅一个月，朱见深便下旨废黜吴氏的皇后之位，将她幽禁在紫禁城西侧的安乐堂。
被废的那一天，吴氏没有哭闹，也没有辩解。她平静地卸下凤冠，换上普通的宫装，在宫女的搀扶下走出中宫。路过翊坤宫时，她看到万贞儿正依偎在朱见深的身边，得意地看着她。吴氏的眼神没有丝毫波澜，她知道，自己输给的不是万贞儿，而是朱见深那份偏执到病态的爱恋。
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